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La β-casomorfina-7, un producto de la digestión de la beta-caseína A1 encontrada en la leche bovina, puede estar asociada a diversos problemas de salud, como enfermedades cardíacas, diabetes tipo 1, autismo, esquizofrenia, síndrome de muerte súbita infantil y ciertos problemas neurológicos. Ante esto, el objetivo de este estudio fue estandarizar un método de genotipado in house para detectar la mutación de nucleótido único en el éxodo 7 del gen CSN2 en vacas de la raza Girolando oriundas de una finca rural del Norte de Minas Gerais. Para tal muestras de sangre de nueve vacas previamente genotipadas fueron recogidas aleatoriamente y sometidas al procedimiento de extracción de ADN. Posteriormente se realizó el análisis de polimorfismo de fragmentos de restricción por la PCR (PCR-RFLP) seguido de la digestión de los Amplicons obtenidos con la enzima de restricción DdeI. La confirmación de la relación genética entre las muestras fue realizada por el análisis multivariado Cluster Analysis con el método de enlace completo para el cálculo de la distancia Euclideana y generación de un dendrograma por el software estadístico Minitab v.16. El amplicón de 121pb correspondiente a la región parcial del gen CNS2 fue detectado en todas las muestras. De las nueve muestras aquí analizadas, siete fueron identificadas el genotipo A2A2 y tres A1A1 para el gen CNS2. Ese resultado indicó 100% de coincidencia entre los resultados del método in housey el genotipado comercial. El método PCR-RFLP en casa estandarizado puede ser útil para el genotipado rápido y confiable del gen CNS2 en bovinos de raza Girolando.
The aim of this research was standardizing a method of in house to detect the mutation of a unique nucleotide in 7 exon of the gene CSN2 in Girolando cattler originally from a rural property of Northern Minas Gerais. To such blood samples from nine cows previously genotyped, they were randomly collected and submitted to the DNA extracting process. Afterwards, it has been accomplished the polymorphism analysis of fragments of restriction by PCR (PCR-RFLP) followed by the amplicon’s digestion obtained with the restriction enzyme DdeI. The confirmation of the genetic relationship among the samples has been accomplished by the multivariate analysis Cluster Analysis with the full linking method for the Euclidean calculation and generating a dendrogram by the statistic software Minitab v.16. The 121pb amplicon corresponds to the partial region of the gene CSN2 has been detected in all samples. From the nine samples analyzed here, it has been identified the genotype A2A2 in seven samples and three A1A1 for the gene CSN2. This result has pointed 100% of coincidence between the results of the in-house method and the commercial genotyping. The PCR-RFLP method in house standardized may be useful for the fast and trustful genotyping of the gene CSN2 in Girolando cattler.
O objetivo deste estudo foi padronizar um método de genotipagem in house para detecção da mutação de nucleotídeo único no éxon 7 do gene CSN2 em vacas da raça Girolando oriundas de uma propriedade rural do Norte de Minas Gerais. Para tal, amostras de sangue de nove vacas previamente genotipadas foram coletadas randomicamente e submetidas ao procedimento de extração de DNA. Posteriormente foi realizada a análise de polimorfismo de fragmentos de restrição pela PCR (PCR-RFLP) seguida da digestão dos amplicons obtidos com a enzima de restrição DdeI. A confirmação do relacionamento genético dentre as amostras foi realizada pela analise multivariada Cluster Analysis com o método de ligação completa para o cálculo da distância Euclidiana e geração de um dendrograma pelo software estatístico Minitab v.16. O amplicon de 121pb correspondente à região parcial do gene CSN2 foi detectado em todas as amostras. Das nove amostras analisadas, seis foram identificadas o genótipo A2A2 e três A1A1 para o gene CSN2. Esse resultado indicou 100% de coincidência entre os resultados do método in house e a genotipagem comercial. O método PCR-RFLP in house padronizado pode ser útil para a rápida e confiável genotipagem do gene CSN2 em bovinos da raça Girolando.
