Acceso usuarios
Los bioensayos funcionales in vitro son fundamentales para la correcta caracterización de medicamentos biológicos como los inhibidores de los puntos de control inmunitarios (ICI). Estos ICI pueden bloquearse mediante anticuerpos que impiden la transmisión de señales coinhibitorias, permitiendo, de esta manera, una respuesta inmunitaria más efectiva contra las células cancerígenas. En este trabajo, se ha puesto a punto un bioensayo in vitro para activar los linfocitos T, a través del correceptor del TcR (CD3), sin la necesidad de antígeno, y evaluar el impacto de la interacción entre HVEM (mediador de entrada del virus del herpes) y BTLA (atenuador de linfocitos B y T) en esta activación. El bioensayo consiste en la realización de un cocultivo entre unas células estimuladoras (línea celular CHO modificada genéticamente para la expresión del gen que codifica para scFv anti-CD3) y como células respondedoras, la línea celular Jurkat TPR, que expresa tres factores de transcripción unidos a tres fluorocromos diferentes (mCherry, CFP y eGFP: unidos a AP-1, NF-kB y NFAT respectivamente), con el objetivo de estudiar su activación mediante citometría de flujo. Durante el trabajo se ha realizado el clonaje de la proteína BTLA y la posterior transducción en las células Jurkat TPR. A continuación, se realizaron los bioensayos en los que se demostró que funcionaban activando los linfocitos T, sin necesidad de presentar antígeno y detectando los fluorocromos mediante citometría de flujo. Mediante este ensayo, comprobamos que la interacción BTLA-HVEM disminuye la activación de las células T y, el bloqueo de este ICI mediante anticuerpos anti-HVEM, aumentaba la respuesta de las células Jurkat TPR respondedoras. En conclusión, hemos desarrollado un sistema experimental in vitro que permite estudiar interacciones ligando/receptor en el contexto de la activación de las células T, para aumentar o reprimir la función de las mismas.
