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Eva Álvarez Merchán, Juan Manuel Fernández Gallego, Juan Carlos Montero Rubio
El Real Decreto 865/2003 para la prevención y control de la legionelosis menciona el método de cultivo de la norma ISO 11731 para el ensayo de Legionella spp., norma en torno a la cual, se definen límites paramétricos. Las debilidades observadas en esta ISO (falsos negativos y elevados tiempos de espera), han hecho necesario buscar métodos alternativos. Se estudia si el método de separación inmunomagnética y cuantificación por colorimetría de Legionella spp., Legipid ® Legionella Fast Detection, (SIM), es adecuado y eficiente en un laboratorio oficial de Salud Pública para muestras ambientales de agua. En ausencia de una metodología normalizada para verificar métodos alternativos, se ha diseñado un método para realizar esta verificación, teniendo en cuenta los criterios específicos para análisis microbiológicos y la guía para kits de ensayo de ENAC. Así, se han calculado los parámetros de precisión y recuperación en las muestras inoculadas y, además, la linealidad a partir de la pendiente y la ordenada en el origen de la relación entre absorbancia y unidades formadoras de colonias, comparando los datos experimentales obtenidos con los resultados de la validación del método. Los resultados fueron satisfactorios en todos los casos. Una dispersión inferior al 20 %, una recuperación del 4 - 71 % y una linealidad conforme con la validación a un nivel de significación superior al 95 %. En base a estos resultados se considera que el método SIM es un método válido para la detección y cuantificación de Legionella spp. en un laboratorio oficial de salud pública.
Spanish Royal Decree 865/2003 on the prevention and control of legionellosis mentions the culture method of standard ISO 11731 for testing Legionella spp., a standard which sets different parametric levels. The weaknesses that have been detected in the method of said standard (false negatives and high waiting times) have made it necessary to look for alternatives. The aim of this study is to determine whether the method of immunomagnetic separation (IMS) and quantification of Legionella spp. Legipid® Legionella Fast Detection is suitable and effective for analyzing environmental water samples in an official public health laboratory. In the absence of a standardized methodology for verifying alternative methods, we devised a method for carrying out this verification taking into account specific criteria for microbiological analysis and the ENAC’s guide for test kits. Thus, we calculated the parameters of precision and recovery of the inoculated samples, as well as the linearity from the slope and the ordinate at the origin of the absorbance-colony forming unit (CFU) relationship, and compared the experimental data we obtained with the results of the validation of the method. The results were satisfactory in all cases: a dispersion below 20%, a recovery in the 4-71% range, and a linearity compliant with the validation with a significance level exceeding 95%. Based on these results, we consider the ISM method to be a valid method for detecting and quantifying Legionella spp. in an official public health laboratory.
O Real Decreto 865/2003 para a prevenção e controle da legionelose menciona o método de cultivo da norma ISO 11731 para o teste de Legionella spp, uma norma em torno da qual são definidos limites paramétricos. As fragilidades observadas nesta ISO (falsos negativos e longos tempos de espera) obrigaram à procura de métodos alternativos. Estuda-se, se o método de separação imunomagnética e quantificação por colorimetria de Legionella spp, Legipid® Legionella Fast Detection, (SIM), é adequado e eficiente num laboratório oficial de Saúde Pública, para amostras ambientais de água. Na ausência de uma metodologia padronizada para verificar métodos alternativos, desenhou-se um método para realizar essa verificação, tendo em conta os critérios específicos para análises microbiológicas e o guia ENAC para kits de teste. Assim, foram calculados os parâmetros de precisão e recuperação nas amostras inoculadas e, adicionalmente, a linearidade da inclinação e da ordenada na origem da relação entre absorbância e unidades formadoras de colônia, comparando os dados experimentais obtidos com os resultados de método de validação. Os resultados foram satisfatórios em todos os casos. Uma dispersão inferior a 20%, uma recuperação de 4% - 71% e uma linearidade de acordo com a validação a um nível de significância superior a 95%. Com base nesses resultados, o método SIM é considerado um método válido para a deteção e quantificação de Legionella spp. num laboratório oficial de saúde pública.
