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Resumen Mediante el análisis del genoma de Anaplasma marginale se han identificado proteínas del sistema de secreción tipo IV, asociadas a la transferencia de sustratos entre bacterias y otros organismos. La proteína VirD4 de este sistema, en otros modelos bacterianos, se asocia con la translocación de proteínas y complejos proteicos involucrados en procesos biológicos que implican la interacción con células hospederas, lo que indica que en A. marginale podría estar asociada a la invasión y supervivencia dentro del eritrocito. Por estas razones los objetivos del presente estudio fueron analizar mediante herramientas bioinformáticas el grado de conservación de la proteína VirD4 entre diferentes cepas mexicanas, e identificar su presencia en la membrana externa en formas infectantes de A. marginale en eritrocitos de bovinos. El análisis de las secuencias nucleótidicas y aminoacídicas de VirD4 mostró 100% de identidad entre los aislados. El péptido sintético ramificado diseñado con base en los análisis reaccionó con sueros de bovinos inmunes e infectados mediante ELISA. Anticuerpos específicos contra MAPVirD4 reaccionaron por inmunofluorescencia indirecta con cuerpos iniciales de A. marginale intraeritrocíticos. Con estos hallazgos inferimos que VirD4 es una proteína conservada que aparentemente se expresa durante la invasión a eritrocitos o es parte importante de la supervivencia de la rickettsia durante la infección, lo que nos indica que el péptido podría ser identificado por la respuesta inmune del bovino durante el proceso de infección, considerándolo como posible candidato vacunal.
Abstract By analyzing the genome of Anaplasma marginale, proteins of the type IV secretion system, involved in the transfer of substrates between bacteria and other organisms, have been identified. In other bacterial models the VirD4 protein of this system is associated with the translocation of proteins and complexes involved in the interaction with their host cells, indicating that in A. marginale this protein might be associated with the invasion and survival within the erythrocyte. For these reasons the objectives of the present study were: the analyisis by bioinformatic tools of the degree of conservation of the VirD4 protein between different Mexican strains, and the detection of this protein in infective forms of A. marginale in bovine erythrocytes. The analysis of the nucleotide and amino acid sequences of VirD4 showed 100% identity between the products. The branched synthetic peptide designed based on the analysis reacted with sera from immune and infected cattle using ELISA assays. Specific antibodies against MAP-VirD4 reacted by indirect immunofluorescence with initial bodies of intraerythrocytic A. marginale. With these findings we infer that VirD4 is a conserved protein that is apparently expressed during the invasion of erythrocytes or is an important element during infection, which indicates that the peptide could be considered as a possible vaccine candidate against bovine anaplasmosis.
